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簡 介：實時熒光定量PCR（Real -Time Quantitative PCR，又稱qPCR）是分析組織細胞中基因表達差異的最為準確的實驗手段和方法。通過SYBR Green I或Taqman探針，實現(xiàn)對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 達到對基因的相對定量、絕對定量和定性分析。

SYBR Green I染料法和Taqman探針法

簡 介：

SYBR Green I染料法：該染料是專一和雙鏈DNA分子結合發(fā)光的熒光染料，每擴增一次，染料結合一次，檢測信號增加一倍；

Taqman探針法：5末端連接熒光基團，3端末端連接猝滅基團，PCR擴增時，兩個基團相互分離，熒光基團得以檢測。

圖：SYBR Green I染料法作用原理

圖：Taqman探針法作用原理

技術優(yōu)勢：

◆ 采用進口RNA提取試劑盒（柱提取法），同時采用DNase I上柱液去除殘余基因組DNA，

有效提高了RNA純度和定量的精確性。

◆ 采用優(yōu)化的高效逆轉錄體系，有效提高cDNA含量，尤其對特殊結構或高GC序列的逆轉

錄效果顯著。

◆ 采用優(yōu)化的SYBR Green I qPCR Premix及Taqman qPCR Premix，有效提高擴增效率以及

減少非特異性擴增。

◆  本公司注重對定量PCR引物及探針的設計及優(yōu)化，尤其是對內參引物的選擇和優(yōu)化，有效提高定量PCR數(shù)據(jù)的準確性及可靠性。

客戶須知：

案 例：

1.       定量PCR每一步做到高標準和高質量

2.       注重定量PCR內參的選擇及優(yōu)化

許多科研人員及公司，隨便選擇一種內參，根本不考慮內參的穩(wěn)定與否，就進行qPCR分析研究，往往得出與實際相反的結論。本公司針對每個模式生物，準備了至少5種候選內參基因引物，針對每一個qPCR實驗，采用gNorm或Normfinder軟件篩選最為穩(wěn)定的內參引物，從而實現(xiàn)qPCR數(shù)據(jù)的可靠性和準確性。

3.       善于質粒標準品制備、稀釋，用于qPCR絕對定量分析

絕對定量中，最重要的莫過于質粒標準品的制備及優(yōu)化，許多科研人員或公司簡單的構建質粒標準品，然后進行稀釋，往往導致標準曲線制備較差。本公司善于選取有效的PCR擴增片段，同時優(yōu)化合適的qPCR引物，采用有效的對標準品的系列稀釋，實現(xiàn)qPCR絕對定量的精確性。